Metodologie pentru colectarea și depozitarea probelor de ciuperci fitopatogene și plante deteriorate

Colectarea și depozitarea probelor de plante și ciuperci deteriorate

Probele de plante cu semne bine definite de boli și agenții patogeni sunt supuse colectării. Plantele erbacee sunt recoltate în întregime, inclusiv flori, fructe și rădăcini - din copaci și arbuști - în principal ramuri cu frunze. În mod obișnuit, se colectează părți ale plantelor care au semne de deteriorare sub formă de placă, depistare, tampoane, umflare, deformări, ulcerații etc., precum și plante fără semne vizibile ale parazitului, dar uscarea sau cu frunze care se prăbușesc brusc..

Probele de plante bolnave sunt colectate din momentul germinării până la recoltare. Obiectele cercetării fitopatologice ar trebui să fie plante care cresc în câmp, grădină, grădină de legume, pajiște și pădure. De asemenea, este necesar să se examineze parcelele de teren nedezvoltate - sol virgin, pârâu, mlaștini și arbuști, deoarece multe plante sălbatice servesc ca gazde intermediare și purtătoare ale bolilor plantelor cultivate. În același timp, ar trebui studiate părțile răsturnate ale plantelor - etapele de iernare (perfecte și imperfecte) ale multor agenți patogeni care sunt sursa unei noi infecții la începutul sezonului de creștere pot rămâne pe ele.

În timpul iernii, este recomandabil să colectați părțile afectate ale plantelor atunci când examinați grădinile, precum și depozitele de legume și materialul de plantare.

Pentru a obține sporulația din sclerotie, perithecia subdezvoltată, diverse strome și alte forme care nu formează spori, împreună cu părți ale plantelor afectate, M.K. Khokhryakov (1969) recomandă plasarea lor în casetele Kleban de la iarnă la iarnă. Acestea din urmă sunt compacte în miniatură, pe un cadru de lemn din care este trasă o plasă de kapron sau sârmă inoxidabilă. Proba de test (frunze, tulpini etc.) este plasată într-o casetă cu 2 cadre. Între jumătățile hârtiei de filtru cu un singur strat dublu, împreună cu o etichetă scrisă pe pergament cu un creion simplu, o casetă este legată și lăsată pe suprafața solului până la primăvară. Este important să așezați caseta astfel încât ciuperca din ea să fie expusă tuturor factorilor naturali: udarea și uscarea, înghețarea și dezghețarea, insolarea și întunecarea etc..

Pentru schimbarea în condiții naturale, ciuperca este plasată sub formă de culturi pure în epruvete, ale căror dopuri de bumbac sunt învelite cu hârtie pergament sau hârtie de urmărire, strânse cu cauciuc la capătul superior. În alte cazuri, cojile de plante erbacee sunt lăsate pentru iernare, atârnându-le de șipci.

Probele de plante afectate imediat după colectare sunt plasate într-un dosar sau plasă botanică și separate între ele prin filtru sau amprentă. Dacă probele s-au ofilit, acestea sunt îndreptate cu atenție, cele care nu pot fi încorporate în plasa botanică (ramuri, tuberculi, fructe etc.) sunt învelite în hârtie. Fiecare eșantion trebuie să fie prevăzut cu o etichetă care indică locul și data colectării, tipul și varietatea plantei, precum și numele colectorului.

Dacă eșantioanele sunt destinate erbariului, atunci acestea sunt plasate în presă, separate anterior unele de altele de un strat de hârtie de amortizare. La fel de umed, hârtia de eliberare este înlocuită cu hârtie uscată. În cazurile în care eșantioanele nu pot fi uscate (fructe suculente, culturi rădăcinoase etc.), acestea sunt fixate în conservarea lichidelor. Astfel de lichide sunt alcoolul (70), formalina (5a), un amestec de alcool cu ​​formalină, soluții de clorură de sodiu (8-9) sau sulfat de cupru (primul). Probele plasate în sticlă sunt turnate cu aceste lichide..

Pentru o păstrare mai lungă, există mai multe rețete. Cel mai frecvent amestec de sulfat de cupru (CuS04-5H20) - 180 g cu timp rapid (CaO) - 180 g și apă - 22,7 litri. Sulfatul de cupru se dizolvă peste noapte în 2 L de apă. Varul se stinge în 20,7 litri de apă și se trece printr-o sită subțire. Dacă nu există var rapid, atunci puteți lua 272 g de var tăiat Ca (OH) 2 și turnați cu atenție soluția de sulfat de cupru în laptele de var. Acest lucru oferă sedimentele cele mai fine suspendate. Soluția este folosită imediat după preparare..

Soluție Knop compus din nitrat de calciu [Ca (N03) 2] - 0,5 g, azotat de potasiu (KNO3) - 0,125 g, sulfat de magneziu (MgS04-7H20) - 0,125 g, fosfat de potasiu (K2HPO4) - 0,125 g, clorură de fier (FeCl3 ) 5 - 1 picătură și apă distilată - 1 l.

Principalul conservant pentru probele muzeale este format din formaldehidă (40) - 25 ml, alcool (95) - 150 ml și apă - 1 l.

Pentru a păstra culoarea verde a eșantioanelor, acestea sunt plasate într-un amestec de fierbere din 1 parte acid acetic glacial saturat cu acetat de cupru cristalin, și patru părți de apă, se fierbe 1-2 minute până când culoarea verde revine, apoi se păstrează într-o a 5-a soluție. formol.

O altă metodă satisfăcătoare este de a plasa materialul într-o a 5-a soluție de sulfat de cupru timp de cel puțin 6 ore și nu mai mult de 24 de ore. Apoi, probele sunt spălate cu apă și păstrate într-o soluție de acid sulfuric (5-6302) -2 ml cu 1 litru de apă distilată.

Conservatorul lui Gesler pentru fructele colorate, acestea sunt formate din clorură de zinc (50 g), 40% formaldehidă (25 ml), glicerină (25 g) și apă (1 l). Pentru ciupercile pătate se folosesc următoarele compoziții: dacă eșantionul conține pigmenți insolubili în apă - acetat de mercur (10 g), acid acetic glacial (5 ml) și apă (1 l) - în prezența pigmenților solubili în apă - acetat de mercur (1 g), acetat de plumb neutru (10 g), acid acetic glacial (10 ml) și alcool 90. (1 l) sau sulfat de zinc (25 g), a 40-a formaldehidă (10 ml) și apă (1 l) ).

Pentru a evita evaporarea lichidelor, borcanele cu probe fixe se închid cu dopuri la sol, dopurile obișnuite sunt umplute cu parafină. Pe fiecare borcan este atașată o etichetă..

Preparatele microscopice sunt preparate cu lactofenol și necol. Lactofenolul cu albastru anilin servește ca principal conservant pentru preparatele permanente care pot fi sigilate cu lac de unghii (este mai bine să aplicați mai multe straturi subțiri). Primul strat trebuie să fie de lac incolor, altfel colorantul din lac pătrunde în lactofenol. Ultimul strat de lac de asfalt ar trebui să ofere o rezistență deosebită. Încălzirea preparatului înainte de aplicarea unei capace accelerează colorarea. Materialul pulverulent uscat trebuie mai întâi umezit cu acetat de etil.

Preparatele Necol sunt adesea făcute prin studierea ciupercilor care cresc pe suprafața unui substrat. Un necol sau un preparat similar de acetat de celuloză este diluat cu acetonă până la consistența glicerolului. O picătură mică din acest lichid este plasată pe o colonie de ciupercă și uscată - aceasta durează de obicei 15-30 de minute. Filmul incolor subțire format cu ciuperca închisă în ea, după uscarea finală, este îndepărtat cu un bisturiu și plasat între două copertine în glicerină pură.

Unele ciuperci formează un aparat conidial delicat. Pentru a face preparate bune, se folosesc culturi de sticlă. În acest caz, este foarte important să respectați condițiile de sterilitate și lucrările se desfășoară în vase Petri sterile, a căror suprafață este ștersă cu alcool și toate instrumentele, copertinele și lamelele sunt complet sterilizate.

Pentru a crea blocuri de cultură pe lamelele de sticlă, o bucată de dimensiune de 7 mm2 este tăiată din agar în vasele Petri, inoculată cu un număr minim de spori pe fiecare parte, acoperită cu un înveliș și așezată într-o cameră umedă (dispozitivul camerei este descris mai jos). Atunci când cultura atinge maturitatea, o parte din spori și structuri purtătoare de spori se atașează de diapozitiv și ochelarii de acoperire. Blocul de agar este îndepărtat și preparatele sunt făcute prin adăugarea de probe de lactofenol cu ​​structurile ciupercii pe lamelele de sticlă și acoperite cu un înveliș fixat. Evitați poluarea aerului prin încălzirea cu atenție.

Metoda de utilizare a copertelor implică creșterea ciupercii în centrul lor. Pentru a face acest lucru, umpleți vasul Petri cu un mediu adecvat și lăsați-l să înghețe. Apoi, faceți două incizii diametrale de agar în unghi drept cu un bisturiu scaldat. Triunghiurile de agar rezultate sunt ridicate și sub fiecare dintre ele, de pe margini, așezate învelișuri arse, care sunt apoi înlocuite. Cupa este întoarsă și aranjarea ochelarilor, vizibilă prin sticla cupei, este încercuită cu un creion de ceară, în centrul ochelarilor, secțiuni patrulatere legate de creion cu laturile de 6-8 mm. Apoi cupa este întoarsă din nou, bucățile inutile de agar sunt tăiate și îndepărtate, în timp ce pătratele înconjurate strălucesc prin agar. Mediul este inoculat și placa este plasată într-un incubator. În cele din urmă, ciuperca crește și se răspândește pe suprafața deschisă a fiecărui pahar, așa cum se poate vedea sub binocular. Cu o răspândire suficientă a ciupercii, copertinele sunt îndepărtate cu o tăiere a agarului înconjurător (deteriorarea hifei, dacă este necesar) și preparatele sunt făcute în mod obișnuit.

Dacă este necesar să trimiteți probe proaspete, procedați după cum urmează: imediat după colectare, sunt așezate în astfel de condiții, astfel încât să nu se deterioreze pe drum. Tulpinile și butașii sunt trimise în mușchi proaspăt, ușor umed, fructele sunt învelite în hârtie și transferate cu bărbierit, etc. Probele mici sunt trimise în pungi de hârtie. Nu puteți utiliza o peliculă din plastic pentru depozitarea și transferul de probe pe termen lung, deoarece un sac de astfel de materiale creează multă umiditate și probele putrezesc rapid.